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關(guān)于布魯氏菌虎紅平板凝集試驗細(xì)節(jié)問題
虎紅平板凝集試驗（Rose Bengal test）是布魯氏桿病血清學(xué)診斷的經(jīng)典初篩試驗。
OIE《陸生動物診斷試驗與疫苗手冊》規(guī)定虎紅平板凝集實驗的主要
步驟
《陸生動物診斷試驗與疫苗手冊》規(guī)定虎紅平板凝集實驗的主要步驟
（1） 試驗前首先將抗原、待檢血清樣品及陰陽性對照血清平衡至室溫（22±4℃）。整個實驗要求在室溫（22±4℃）下進(jìn)行。必須將抗原及血清平衡至室溫，否則會降低試驗的敏感性。
（2）吸取 25-30µL 血清樣品至“白色背景”的瓷磚、釉或塑料材質(zhì)的反應(yīng)板上。
（3）輕柔振搖虎紅抗原試劑瓶，使其均質(zhì)，吸取等體積的抗原加至靠近血清樣品的白色背景的反應(yīng)板上。
（4）用潔凈的玻璃或塑料棒將血清與抗原“迅速同時混勻”形成 2cm 直徑的圓形或橢圓形。在 OIE
布魯氏菌病參考實驗室，使用虎紅專用混勻設(shè)備，將血清和抗原混勻成圓形，一次可同時混勻 48 個血清樣品。OIE
要求所有血清樣品及抗原需同步混勻，并形成 2cm 直徑的圓形或橢圓形。
（5）置 3D（圓形）或 2D（橢圓形）混勻器混勻 4min；混勻“4min 立即”觀察結(jié)果。
（6）判定結(jié)果：白色背景、自然光下觀察，嚴(yán)禁在任何燈光下觀察，出現(xiàn)“肉眼可見凝集現(xiàn)象”者判為陽性。
（7）每次實驗必須設(shè)置陰陽性對照血清，且 OIE 規(guī)定“陽性對照血清要求為弱陽性（+或++）”（見下圖）,便于弱陽性血清樣本的判別以降低假陰性的誤判，進(jìn)而用試管凝集試驗復(fù)檢。
國標(biāo) GB/T18646-2002 《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》主要步驟
（1）國標(biāo)中未明確規(guī)定實驗環(huán)境溫度；而 OIE 對環(huán)境溫度嚴(yán)格要求。
（2）國標(biāo)中血清及抗原加樣于玻璃板上，結(jié)果判定在玻璃板上進(jìn)行，并非白色背景。
（3）國標(biāo)中使用牙簽類小棒將血清和抗原“逐個”混勻成橢圓形，一次最多只能做 10 個血清樣品，而且很難做到同步混勻。
（4）國標(biāo)規(guī)定混勻“4min 內(nèi)”觀察結(jié)果。 （5）國標(biāo)中未對陰陽性血清的凝集結(jié)果進(jìn)行要求，僅說明“在陰陽性血清對照實驗成立的條件下，對被檢血清進(jìn)行判定”。 |
